眼镜蛇毒口服后兔血清对人肺腺癌细胞株的影响

一、中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响（论文文献综述）

杨佳妹^[1]（2014）在《以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的筛选与研究》文中提出肝癌是严重威胁人类生命健康的恶性疾病,全球每年新发肝癌病例数达100万人以上,防治肝癌是医学界面临的重要问题。近年来,由于中医药治疗肝癌的整体调节作用及副作用较小等特点,受到世界医药界的广泛关注。在中医理论指导下,从中药中寻找开发有效、安全的抗肝癌药是一条新的途径。本课题通过以下实验进行抗肝癌中药复方的组方筛选与研究。第一部分基于复杂网络的治疗肝癌常用中药的用药规律分析运用复杂网络的方法,对2002年-2013年中医药治疗肝癌的文献进行总结分析,研究治疗肝癌中药的用药规律并发现新的中药复方。结果发现,治疗肝癌的常用中药主要以清热解毒药、活血化瘀药、补益药为主,常用的中药主要有白术、黄芪、茯苓、甘草、白花蛇舌草等。常用的经典方剂主要有四君子汤、逍遥散等。发现了以清热解毒、益气健脾等不同功效为主的四个核心组方。第二部分以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的组方筛选采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,首先根据前期实验结果,比较清热解毒中药石见穿与半枝莲、白花蛇舌草的抑瘤作用。结果发现,同等剂量时,石见穿的抑瘤率达到了45.7%,明显强于白花蛇舌草的0.4%和半枝莲的30.3%。表明石见穿对H22肝癌小鼠的肿瘤生长具有较强的抑制作用。在此基础上,根据文献数据挖掘的结果,我们以黄芪、石见穿、女贞子、姜黄组成扶正化瘀解毒方,通过正交试验,对复方组成药物进行药量和配比的筛选与优化。结果发现,扶正化瘀解毒方的最佳配比组方是：黄芪45g、石见穿20g、女贞子20g、姜黄30g。第三部分扶正化瘀解毒方提取工艺的优化应用正交试验设计,通过考察溶剂浓度、溶剂倍数、提取时间、提取次数四个因素,以药物的主要成分含量作为评价指标,对扶正化瘀解毒方的四味中药分别进行提取工艺的优化。最终确定的工艺为：姜黄的提取工艺为80%乙醇8倍量回流提取1小时,提取两次；黄芪的提取工艺为65%乙醇8倍量回流提取3小时,提取两次；女贞子的提取工艺为65%乙醇4倍量回流提取1小时,提取两次；石见穿的提取工艺为60%乙醇10倍量回流提取3小时,提取两次。工艺确定后,采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,以抑瘤率为指标比较了扶正化瘀解毒方新工艺与简单醇提物之间的差异,实验表明扶正化瘀解毒方新工艺的抑瘤率可达55%,明显高于之前简单醇提物的38%的抑瘤率。第四部分扶正化瘀解毒方对H22肝癌荷瘤小鼠的影响采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,研究扶正化瘀解毒方最优工艺对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。两次实验表明,扶正化瘀解毒方中剂量组（15g生药/kg）的平均抑瘤率可达46.9%,远高于金龙胶囊的18.3%。表明工艺优化后的扶正化瘀解毒方可明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长。采用H22肝癌腹水小鼠模型,观察扶正化瘀解毒方对小鼠生存期的影响。实验结果显示,扶正化瘀解毒方中剂量组（15g生药/kg）的生命延长率可达23.56%,低剂量组（7.5g生药/kg）可达42.79%,远高于环磷酰胺的20.94%和金龙胶囊的11.52%。表明工艺优化后的扶正化瘀解毒方可明显延长肿瘤小鼠的生存期。通过以上实验研究,本课题在中医药理论指导下,以肝癌为目标,通过数据挖掘与实验研究,初步筛选出了一个治疗肝癌的中药复方-扶正化瘀解毒方。

陈俊^[2]（2013）在《14-噻吩基次亚甲基苦参碱抗鼻咽癌作用及机制的实验研究》文中进行了进一步梳理目的鼻咽癌（NPC）是严重威胁人民群众健康的常见恶性肿瘤之一,目前治疗鼻咽癌最有效的手段是以放疗为主并结合化疗的综合治疗,但这两种方式的副作用都较大,严重影响了治疗的进行。因此寻找新的抗肿瘤药物就成为当今研究的热点。近年来,研究发现苦参碱在抑制肿瘤生长、杀伤和诱导肿瘤细胞凋亡等方面表现出显着活性,并受到广泛关注。但由于苦参碱抑制肿瘤细胞生长的有效剂量较高,并不是一个高效治疗肿瘤的药物。因此,本课题组为了提高其抗癌效力,以苦参碱为先导化合物,通过化学合成方法对其结构进行改造,合成了20个结构新颖的苦参碱衍生物,并进行了抗鼻咽癌作用的筛选。从中初步筛出具有抗肿瘤活性成分——14-噻吩基次亚甲基苦参碱体（下文称改构体X）,本实验室前期研究已发现改构体X具有强于苦参碱的体外抑制鼻咽癌细胞CNE2增殖的作用。为了进一步研究其抗肿瘤的作用和机制,本课题将系统地研究14-噻吩基次亚甲基苦参碱对人鼻咽癌细胞CNE1、 CNE2体内外的抗鼻咽癌作用,以其能找出确切有效的抗鼻咽癌的药物并为下一步获得自主知识产权治疗鼻咽癌的新药物提供实验依据。研究内容：第一部分14-噻吩基次亚甲基苦参碱体外抗鼻咽癌作用的实验研究方法分别以14-噻吩基次亚甲基苦参碱和苦参碱对人鼻咽癌细胞株CNE1, CNE2进行干预,利用MTT法检测改构体X对细胞的生长抑制曲线,倒置显微镜观察细胞形态学变化,电镜下观察改构体X对细胞超微结构的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测相关凋亡蛋白表达等情况。结果经MTT法发现在体外两种药物对CNE1及CNE2细胞均有抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性,且苦参碱经过结构改造后的化合物14-噻吩基次亚甲基苦参碱显示出强于其先导化合物苦参碱的抑制作用,其1-5天的IC50值分别低于对应天数的苦参碱的IC50。形态学结果发现,14-噻吩基次亚甲基苦参碱作用鼻咽癌细胞后,光镜下可见细胞变圆变小；改构体X作用48h后电镜下观察可见两种鼻咽癌细胞均呈凋亡的形态改变,如细胞皱缩,核内异染色质明显增多,核周隙增大,凋亡小体形成等形态。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比14-噻吩基次亚甲基苦参碱各剂量组、苦参碱IC50剂量组以及顺铂组对CNE1和CNE2细胞株均有促进细胞凋亡的作用,其P<0.05,有统计学意义。14-噻吩基次亚甲基苦参碱对CNE1的促凋亡作用从数据上显示强于对CNE2细胞的促凋亡作用。细胞周期分析结果显示：对于细胞系CNE1,14-噻吩基次亚甲基苦参碱各剂量组和苦参碱处理组均可将CNE1细胞阻滞于G1期,随改构体X浓度的增加,其阻滞作用逐渐增强,其G1期的细胞数明显高于对照组G1期细胞（P<0.01）。顺铂则可使CNE1细胞阻滞于S期；对于细胞系CNE2,与对照组相比,可以看到改构体X各剂量组S期细胞比例均有所升高,其中,高剂量组差异具有显着性意义（P<0.05）,苦参碱处理组和顺铂组则可将CNE2细胞阻滞于G1期并有显着差异（P<0.01）。Western blot结果显示：药物作用CNE1细胞48h后,14-噻吩基次亚甲基苦参碱各剂量组细胞内Bax、p53蛋白含量随剂量的增大而升高,三种剂量处理下与阴性组相比均具统计学意义（P<0.05,P<0.01）,并有一定的剂量依赖性,Caspase-3,-8和-9的含量也有不同程度升高,其中,中、高剂量组与阴性对照组相比具统计学意义（P<0.05,P<0.01）；苦参碱处理后Bax明显高于对照组（P<0.05）,p53蛋白则未显示出统计学差异,Caspase-3、8、9的含量与对照组相比也显着增高（P<0.05）；顺铂组Bax、p53、Caspase-3,-8的含量与阴性对照组相比显着增高,均表现出统计学差异（P<0.05,P<0.01）；苦参碱、改构体X高剂量组以及顺铂组细胞Bcl-2含量显着低于对照组（P<0.05,P<0.01）。对于CNE2细胞,药物作用48h后,14-噻吩基次亚甲基苦参碱中、高剂量组细胞内Bax和Caspase-9与阴性对照组相比显着升高（P<0.05,P<0.01）,改构体X各剂量组Caspase-3蛋白均有不同程度的升高,且与对照组相比有显着性差异（P<0.05,P<0.01）,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达则显着降低（P<0.05,P<0.01）；苦参碱处理后Bax和Caspase-9表达有所增高,但不具统计学差异,Caspase-3的含量与对照组相比显着增高具有统计学意义（P<0.05）,并能显着下调Bcl-2的表达；顺铂组各蛋白表达情况与苦参碱类似。第二部分14-噻吩基次亚甲基苦参碱体内抗鼻咽癌的研究方法将CNE1及CNE2细胞分别接种于裸鼠腋下建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,待肿瘤长至一定体积后设14-噻吩基次亚甲基苦参碱组、苦参碱、顺铂组及对照组进行治疗,每日测量裸鼠的体重、瘤体体积等,治疗15天后取出瘤体并测量瘤重。另结合光镜下观察瘤组织HE染色、透射电镜下观察瘤组织超微结构变化、原位组织化学法（TUNEL法）检测肿瘤组织细胞凋亡、免疫组织化学法检测肿瘤组织内Bcl-2, Bax、 p53、Caspase-3和-9的蛋白表达。结果：随着14-噻吩基次亚甲基苦参碱给药剂量的增加可以发现瘤体积增长幅度越来越小、瘤重越来越轻。光镜下观察HE染色切片可见各给药组瘤细胞比例减少,大量炎症细胞浸润,肿瘤细胞被大量成纤维细胞包裹,电镜下可见给药组细胞细胞核核仁浓缩或碎裂,并见到类圆形的凋亡小体；在原位组织化学法（Tunnel法）检测中可见药物组凋亡细胞所占比例增加；在免疫组织化学法中可见给药后细胞内Bcl-2蛋白出现表达下调,Bax、p53、Caspase-3和-9蛋白的表达上调。结论：14-噻吩基次亚甲基苦参碱在体内外均具有抑制人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞增殖的作用。且产生抑制作用的剂量都低于其先导化合物苦参碱。其抑制细胞增殖的机制可能与细胞周期阻滞,上调促凋亡蛋白Bax、p53、Caspase-3、-8和-9等的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达有关,并可能与Caspase依赖性的细胞凋亡途径有关。

原超广^[3]（2011）在《金龙胶囊联合GP方案对晚期非小细胞肺癌血清VEGF表达和疗效的影响》文中研究说明目的探讨金龙胶囊联合吉西他滨+顺铂（Gemcitabine and cisplatin, GP）方案化疗对晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）表达、客观疗效、中医症状变化和生活质量的影响。方法将60例晚期NSCLC患者随机分为两组：治疗组30例,GP方案化疗+口服金龙胶囊；对照组30例,单纯GP方案化疗。观察治疗前后两组血清VEGF表达水平变化、客观疗效、中医症状、生活质量及不良反应的变化情况。结果1.血清VEGF表达水平变化,治疗组和对照组治疗前血清VEGF水平分别为（824.50±164.82） pg/mL、（831.07±143.42）pg/mL,差异无有统计学意义（P>0.05）。治疗组和对照组治疗后血清VEGF水平分别为（542.13±114.66） pg/mL、（748.53±149.52） pg/mL,均较治疗前的下降,（P均<0.05）；治疗后治疗组血清VEGF水平较对照组下降更明显,差异有统计学意义（P<0.05）2.在肿瘤客观疗效上,治疗组临床获益率为86.67%,对照组临床获益率63.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。3.中医症状情况,治疗组症状总改善率为80.00%,对照组症状总改善率为53.33%,差异有统计学意义（P<0.05）。4.生活质量方面,治疗组总改善率55.33%,对照组总改善率30%,差异有统计学意义（P<0.05）5.治疗后两组均出现不同程度骨髓抑制、恶心呕吐及便秘等毒副反应；均未出现肝肾功能异常及心电图异常表现,无致死性毒副反应发生。两组毒副反应发生率差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.金龙胶囊联合GP方案化疗能进一步降低晚期NSCLC患者血清VEGF水平。2.金龙胶囊联合GP方案化疗较单纯GP方案化疗提高患者临床获益率,进一步改善中医证候,提高生活质量。

赵永杰^[4]（2010）在《艾克达康颗粒对中期原发性肝癌患者CD4+、CD8+活性的影响》文中指出目的:通过观察艾克达康颗粒治疗中期原发性肝癌患者CD4+、CD8+活性的影响,旨在对中医药治疗原发性肝癌机制做进一步的探讨,为中西医结合治疗原发性肝癌寻找理论依据。方法:将60例中期原发性肝癌患者随机分为治疗组30例和对照组30例。两组均给予常规对症治疗及保肝治疗,治疗组在此基础上服用艾克达康颗粒,疗程为2个月。分别观察两组治疗前后中医症状改善情况、CD4+、CD8+活性及CD4+/CD8+比值、肝功、甲胎蛋白等的变化,并与对照组进行对比,分析其差异。结果:1.治疗组治疗前后比较CD4+浓度升高,P<0.05,差异有统计学意义,与对照组比较P<0.05,差异显着。2.治疗组治疗前后比较CD4+/CD8+比值升高,P<0.05,差异有统计学意义,与对照组比较P<0.05,两组对照有显着差异。3.治疗组治疗前后比较CD8+浓度下降,P >0.05,差异无统计学意义,与对照组比较P >0.05,两组对照无显着差异。4.治疗组在改善肝功、降低甲胎蛋白等方面效果优于对照组。5.卡氏评分:治疗组提高、稳定率明显高于对照组,P<0.05,有统计学意义,治疗组下降率低于对照组, P<0.05,有统计学意义。6.体重变化比较:治疗组提高、稳定率明显高于对照组,P<0.05,有统计学意义,治疗组下降率低于对照组, P<0.05,有统计学意义。结论:1.艾克达康颗粒治疗中期原发性肝癌疗效确切,治疗组优于对照组。2.通过系统的临床观察,艾克达康颗粒可提高CD4+T淋巴细胞浓度及CD4+/CD8+比值,说明该药增强中期原发性肝癌患者机体免疫力。3.艾克达康颗粒在中期原发性肝癌治疗中能够改善患者症状、改善肝功、提高生活质量,有确切疗效。

段玲欣^[5]（2009）在《旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究》文中进行了进一步梳理为筛选旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,观察其抗肿瘤效果,以探讨其抗肿瘤机制,本研究首先构建了旋毛虫cDNA表达文库,用抗Sp2/0骨髓瘤细胞的多克隆抗体对文库进行筛选,获得旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因,利用5’-RACE技术进行末端快速扩增获得全长后,将该基因在真核表达载体中表达。应用斑点杂交技术对相关抗原基因进行定位,并进行小鼠抗肿瘤试验。实验结果表明,成功构建了旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库,文库容量为1.9×106pfu/mL,重组率为97.5%,扩增后文库滴度为1.6×109pfu/mL。经过3轮筛选,获得一个旋毛虫肌幼虫相关抗原基因片段,通过5’-RACE扩增该基因全长,测序结果显示TS2全长为569bp,含有一大小为411bp的开放阅读框。将其命名为TS2。登陆NCBI进行Blast比对发现该基因为核糖体蛋白S24基因,与DNA修复、细胞发育调控和细胞分化有关。ELM服务器分析结构域,表明此序列蛋白质含有4个精氨酸二元转移酶切割位点,1个羧基肽酰胺化位点和1个氨基葡聚糖附着位点。核酸疫苗重组质粒pVAX1-TS2转染Hela细胞,PCR和Western blotting检测结果表明目的基因在其中得到正确转录和表达,表达蛋白具有反应原性。应用核酸疫苗重组质粒免疫小鼠进行的体内抗肿瘤试验表明,试验组小鼠产生了特异的细胞免疫应答,CD3+、CD4+T淋巴细胞均进行了有效增殖。试验组和对照组肿瘤体积和重量的统计学分析比较表明,旋毛虫核酸疫苗重组质粒的抑瘤效果明显高于对照组。

侯新楠^[6]（2008）在《壁虎抗肿瘤研究》文中提出本课题旨在追踪壁虎抗肿瘤物质基础,对主要抗肿瘤活性大分子进行分离纯化研究,并初步探讨壁虎抗肿瘤蛋白组分的药理作用机制。采用小鼠移植性肿瘤H22进行壁虎鲜品与炮制品水提物体内抗肿瘤活性研究;用MTT法比较壁虎鲜品与炮制品水提物对多种肿瘤细胞体外增殖抑制情况。实验结果可看出,壁虎鲜品与炮制品对体内外肿瘤皆有抑制生长作用,但无显着性差异。干品不同浓度组的脾指数和胸腺指数与阳性药物组相比明显增大（P<0.01或P<0.05）;而鲜品只有低剂量组的脾指数较阳性对照组升高（P<0.05）,鲜品中、高剂量组的胸腺指数较阳性对照组明显升高（P<0.01）。说明壁虎炮制品对实验动物的免疫力有一定的增强作用。由于鲜品的获得受季节影响,且运输、贮存不便,传统中医也多用炮制品入药,且炮制品有提高免疫力的作用,因此选取壁虎的炮制品进行深入研究。比较水提取物、乙醇提取物及水提物对肿瘤细胞的生长抑制情况,发现不同组分均有抗肿瘤活性。可能是多种成分共同起作用。从大量文献报道看,大多数动物药中的抗肿瘤活性成分为多肽或蛋白质类物质。壁虎中主要成分是蛋白质,所以对壁虎提取物中蛋白类成分的抗肿瘤活性成分进行研究。深入进行壁虎抗肿瘤蛋白的分离纯化研究,首先用硫酸铵分级沉淀对壁虎粗提物进行分离。将粗提液分为四个沉淀级别,并进行了其中三个沉淀组分的细胞药效比较,选出硫酸铵组分得率高,细胞药效佳的组分进行下一步实验。40%沉淀中蛋白质含量少,含有大量油脂性成分。60%和80%的沉淀组分中蛋白质含量较高,加药后观察细胞形态发现可使细胞伸长。根据各项指标综合考虑,选择60%和80%组分进行下一步分离纯化研究。第二步用两种凝胶过滤层析介质对硫酸铵组分进行分离。从分离结果看,Sephadex G-25将样品分为三个峰,即三个组分;Sephadex G-75将样品分为两个峰。Sephadex G-25的分离效果较好,且将硫酸铵集中到第二个峰中,所以用Sephadex G-25进行分离,起到了分离除盐的作用。细胞药效实验中显示峰1（G1）的活性最强,选用G1进行下一步分离。而后分别用阳离子交换剂CM spharose Fast Flow和阴离子交换剂DEAE纤维素DE-52两种离子交换介质进行层析。结果:G1大部分组分不能吸附在CM spharose Fast Flow介质上,而可以被吸附在DE-52介质上,并可分离出较明显的两个峰。所以认为G1组分中绝大部分是酸性蛋白质,等电点小于7,不适合用阳离子交换剂分离。经过三步分离后纯化效果不理想,所以更换纯化路线。首先将硫酸铵分级沉淀细化,共分为7个沉淀级别,将其中6个级别做细胞药效实验,发现40%、80%、90%组分效果较好。从得率结果分析,40%得率最少,80%、90%组分得率较高,且有细胞伸长作用。因此选取70-90%组分进行深入纯化研究。用sephadex G-25分离70-90%组分,同样G1的细胞药效实验的结果最好。将G1组分用三种常用的疏水性差异较大的介质进行阶段洗脱分离,结果:三种介质都可以对G1进行分离,但上样量和各种填料所得组分得率不同。Phenyl FF的上样量最大,得率最高。从细胞药效实验结果看,各分离组分无明显差异。用SDS-PAGE电泳检查分离的效果,比较粗提物、硫酸铵沉淀70-90%、G1的电泳成分差异,发现各步分离都起到了纯化的效果。通过查阅文献发现,大多数抗肿瘤中药都有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,所分离的壁虎蛋白G1组分的抗肿瘤作用机制未见报道,所以首先从诱导凋亡的角度对此成分的作用机制进行研究。用形态学观察和流式细胞计数法来检测是否有诱导细胞凋亡作用。结果发现形态学观察其诱导凋亡作用不明显,流式细胞术检测其有一定的诱导凋亡的作用。由于时间有限,未对其进行其他检测以证明。须在以后的实验中进一步验证。

王鸿程^[7]（2008）在《抗白介素-4受体单抗与眼镜蛇毒细胞毒素构建的免疫毒素靶向治疗胰腺癌的实验研究》文中认为一研究目的:为探索一种新的免疫毒素治疗胰腺癌的方法,通过SPDP化学偶联法,我们将眼镜蛇毒细胞毒素（CTX）与抗IL-4R单克隆抗体（MAIL4R）构建成免疫毒素MAIL4R-CTX,观察其是否具有导向性杀伤胰腺癌细胞的作用。二材料与方法1.眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化:先采用SP-Sephadex C-25离子交换柱层析、再用Superdex 75凝胶过滤及Phenyl- Sepharose High Performance疏水层析两步从舟山眼镜蛇粗毒中精细纯化分离CTX。2.免疫毒素的制备:应用SPDP偶联法,在室温下,先将CTX与SPDP反应生成CTX-PDP;再将MAIL4R与SPDP反应生成MAIL4R-PDP,后者在DTT的作用下还原为MAIL4R-SH;最后CTX-PDP与MAIL4R-SH在室温下充分反应至少24小时后,生成抗白介素4-受体单抗-细胞毒素免疫毒素（MAIL4R-CTX）。3.采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向免疫扩散和免疫斑点试验检测免疫毒素的组成。4.采用免疫组织化学染色检测胰腺癌组织中IL-4R的表达。采用免疫细胞化学染色检测体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1、BxPC-3中IL-4R的表达。5.采用DAB法检测免疫毒素MAIL4R-CTX对高表达IL-4R细胞BxPC-3、PANC-1和不表达IL-4R人肺腺癌细胞H1299的结合能力。6.采用MTT法分别测定CTX、MAIL4R及MAIL4R-CTX对体外培养胰腺癌细胞和肺癌细胞的作用。三结果1.眼镜蛇毒粗毒的SP-Sephadex C-25柱层析分离共得14个蛋白峰;组分XIII鉴定为细胞毒素,再经Superdex 75凝胶过滤和Phenyl-Sepharose HP疏水层析获得单一对称蛋白峰,测其分子量为:77.381kDa。将其命名为CTX。2.CTX与SPDP反应物经Superdex30凝胶柱后获得的第一峰为CTX-PDP;MAIL4R与SPDP反应物经Superdex30凝胶柱获得的第一峰为MAIL4R-PDP;MAIL4R-PDP经DTT还原后再经凝胶柱获得的第一峰为MAIL4R-SH;最后将过量的CTX-PDP与MAIL4R-SH反应物经Superdex30凝胶过滤,获得2个蛋白峰,第一峰即为免疫毒素MAIL4R-CTX。3.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向免疫扩散和免疫斑点试验显示该免疫毒素分子中既含有CTX也含有MAIL4R。4.免疫组织化学染色显示在胰腺癌细胞中,细胞质呈现均匀着色的棕黄色颗粒,而正常胰腺组织细胞均为阴性着色。免疫细胞化学显示在胰腺癌PANC-1、BxPC-3细胞中,细胞质呈现棕黄色颗粒着色,而H1299细胞为阴性着色。5.高表达IL-4R的BXPC-3和PANC-1细胞DAB染色为棕色,而不表达IL-4R细胞H1299则未被染色。6.采用MTT法观察到,MAIL4R-CTX在1.2 ug/ml时即明显抑制PANC-1、BxPC-3细胞的生长,在浓度为18.75ug/ml作用4h时PANC-1和BxPC-3细胞分别有86.4%和95.2%被杀伤,H1299细胞仅为26.8%;CTX对PANC-1,BxPC-3和H1299细胞均有明显抑制作用,在浓度为8ug/ml时对三株细胞的抑制率分别达到88.5%,87.2%和90%,但三者无明显差别;MAIL4R对PANC-1、BxPC-3和H1299细胞均无明显抑制作用。四结论1.采用SP-Sephadex C-25阳离子交换柱层析、Superdex 75凝胶过滤及Phenyl-Sepharose HP疏水层析三步分离纯化可得到低毒高效的眼镜蛇毒细胞毒素（CTX）纯品。2.以SPDP法可以成功地将抗白介素-4受体单克隆抗体（MAIL4R）与CTX构建成免疫毒素MAIL4R-CTX。3.胰腺癌组织和胰腺癌细胞高表达IL-4R,正常胰腺组织不表达IL-4R。免疫毒素MAIL4R-CTX对高表达IL-4R的胰腺癌细胞具有选择性杀伤作用。

任先达,张海伟,叶春玲,蔡绍晖,叶开和^[8]（2004）在《眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响》文中进行了进一步梳理目的 :了解眼镜蛇毒灌胃后的兔血清 （serumofrabbittakingorallycobravenom ,SRCV）对人鼻咽癌CNE - 2细胞的影响。方法 :采用体外细胞培养的方法 ,观察SRCV对人鼻咽癌CNE - 2细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用 ,及对细胞生长和分裂指数的影响。结果 :发现SRCV能够明显抑制鼻咽癌CNE - 2细胞的生长 ,且其抑制效应随剂量的增加而增加 ,但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论 :SRCV对鼻咽癌CNE - 2细胞的生长有明显的抑制作用 ,并且有高度的选择性

孙鹏^[9]（2003）在《眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肝癌的抑瘤及促凋亡作用》文中研究说明目的：研究眼镜蛇毒灌胃后的兔血清（the serum of rabbit taking orally cobra venom，SRCV）对肝癌的体内外抑瘤作用和诱导凋亡作用，并评价其安全性。 实验方法：根据血清药理学方法，制备SRCV，以人肝癌HepG-2细胞及正常人胚肺成纤维细胞为靶细胞，以小鼠肝癌移植瘤为动物模型，通过台盼蓝拒染实验、在体抑瘤实验、流式细胞仪分析、电镜观察、TUNEL测试等实验方法，观察该制剂对肝癌的体内外抑瘤及在体促凋亡作用。通过急性毒性实验和半数有效量测定评价其安全性。 实验结果：1)高、低剂量SRCV各组的细胞毒作用均显着强于同浓度正常血清（P＜0.01），其中5mg／ml剂量组的增殖抑制率均高于5μg／ml阿霉素（P＜0.01）；而高剂量SRCV的抑制率略高于同浓度低剂量SRCV，但无统计学显着性。同时，高剂量SRCV（5mg／ml）有显着的抗肿瘤细胞增殖作用，其作用与15μg／ml阿霉素相近。2)SRCV及正常兔血清各剂量组对人胚肺成纤维细胞有不同程度促进细胞增殖的作用，而前者促进细胞增殖的作用更强，其中1、2、5mg／ml剂量组与同浓度正常兔血清比较具统计学差异（P＜0.05）。3)急性毒性实验结果，SRCV的急性毒性最小，经酸热处理后蛇毒的毒性比眼镜蛇毒原毒也有所下降，其LD50均有非常显着性差异（P＜0.01）。以三者LD1的1／3量给药进行的抑瘤实验，均有显着抑瘤作用（P＜0.01），其中SRCV的抑瘤率最高，经酸热处理后蛇毒的抑瘤效果与原毒相似。SRCV的半数有效量测定结果及其相对毒性参数，说明它的相对毒性较低。4)流式细胞仪分析及TUNEL测试表明SRCV使小鼠肝癌移植瘤的凋亡率显着升高，而电镜下观察可见典型凋亡细胞，光镜下观察TUNEL处理的组织切片也可见凋亡细胞。根据上述实验结果。 结论：1)SRCV对肿瘤细胞具高度选择性抑制作用，且其细胞毒作用与抑制肿瘤细胞的增殖有关；而对正常增殖细胞，不但不抑制，还能促进细胞增殖。2)SRCV较原毒的毒性降低，但仍保留了抗癌活性。3)SRCV对小鼠肝癌移植瘤具在体促凋亡作用，与前期的体外促凋亡研究结果一致，提示SRCV的抑瘤作用与其诱导细胞凋亡有关。4)该种血清制剂仍然不够理想，有必要在今后研究中通过对有效组分的分离纯化，进一步提高其效价，降低其毒性。

孙鹏,徐辰,任先达,刘建军,李晓红^[10]（2002）在《口服三种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌移植瘤的抑瘤作用》文中研究表明目的 :了解口服 3种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌的在体抑瘤作用。方法 :按Bliss法设计急性毒性实验 ,蛇毒兔血清、原毒和经酸热处理后蛇毒分别一次性给小鼠灌胃 ,观察其急性毒性。移植小鼠腹水型肝癌于小鼠右腋皮下 ,应用以上 3种形式蛇毒连续灌胃 9d ,每天给药量以最大耐受量 （LD1）的 1/3,计算其抑瘤率。结果 :小鼠口服上述 3种形式蛇毒的LD50 及 95 %可信限分别为 5 4 10mg·kg- 1（46 5 0～ 6 2 90mg·kg- 1）、5 2 94mg·kg- 1（42 0 7～ 6 6 6 3mg·kg- 1）和 97 4 5mg·kg- 1（83 6 2～ 113 5 6mg·kg- 1）。 3种形式蛇毒 2次抑瘤实验的抑瘤率 :蛇毒兔血清冻干粉为35 5 %、32 9% ,原毒为 2 2 9%、2 0 3% ,经酸热处理后蛇毒为 2 5 3%、2 1 3%。结论 :眼镜蛇毒原毒的抗肿瘤作用在蛋白变性或消化吸收后仍然得以保留 ,蛇毒兔血清冻干粉的毒性较其他两种低但抑瘤作用强

二、中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响（论文提纲范文）

（1）以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的筛选与研究（论文提纲范文）

（2）14-噻吩基次亚甲基苦参碱抗鼻咽癌作用及机制的实验研究（论文提纲范文）

（3）金龙胶囊联合GP方案对晚期非小细胞肺癌血清VEGF表达和疗效的影响（论文提纲范文）

（4）艾克达康颗粒对中期原发性肝癌患者CD4+、CD8+活性的影响（论文提纲范文）

（5）旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究（论文提纲范文）

（6）壁虎抗肿瘤研究（论文提纲范文）

（7）抗白介素-4受体单抗与眼镜蛇毒细胞毒素构建的免疫毒素靶向治疗胰腺癌的实验研究（论文提纲范文）

（8）眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响（论文提纲范文）

（9）眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肝癌的抑瘤及促凋亡作用（论文提纲范文）

（10）口服三种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌移植瘤的抑瘤作用（论文提纲范文）

四、中华眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人肺腺癌细胞株的影响（论文参考文献）

• [1]以肝癌为目标的扶正化瘀解毒方的筛选与研究[D]. 杨佳妹. 北京中医药大学, 2014(09)
• [2]14-噻吩基次亚甲基苦参碱抗鼻咽癌作用及机制的实验研究[D]. 陈俊. 广西医科大学, 2013(10)
• [3]金龙胶囊联合GP方案对晚期非小细胞肺癌血清VEGF表达和疗效的影响[D]. 原超广. 福建中医药大学, 2011(04)
• [4]艾克达康颗粒对中期原发性肝癌患者CD4+、CD8+活性的影响[D]. 赵永杰. 黑龙江中医药大学, 2010(07)
• [5]旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究[D]. 段玲欣. 吉林大学, 2009(08)
• [6]壁虎抗肿瘤研究[D]. 侯新楠. 北京中医药大学, 2008(01)
• [7]抗白介素-4受体单抗与眼镜蛇毒细胞毒素构建的免疫毒素靶向治疗胰腺癌的实验研究[D]. 王鸿程. 福建医科大学, 2008(03)
• [8]眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响[J]. 任先达,张海伟,叶春玲,蔡绍晖,叶开和. 暨南大学学报(自然科学与医学版), 2004(04)
• [9]眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肝癌的抑瘤及促凋亡作用[D]. 孙鹏. 暨南大学, 2003(03)
• [10]口服三种形式眼镜蛇毒的急性毒性及对肝癌移植瘤的抑瘤作用[J]. 孙鹏,徐辰,任先达,刘建军,李晓红. 暨南大学学报(自然科学与医学版), 2002(04)

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